上海秉越電子儀（yí）器有限公（gōng）司

一、要樹立科學必須真實的觀念，實（shí）驗態度（dù）要端正。
 
要懷著一顆為了出具真實、準確（què），可信數據而敬（jìng）畏的心去申請能（néng）力驗（yàn）證。
實驗要求科學嚴謹,實驗（yàn）要預先充分練習和實踐。能力驗證是對實驗室綜（zōng）合（hé）實驗（yàn）水（shuǐ）平（人員（yuán），設備，環境等多因素）的評價。
首先要選好實驗（yàn）項（xiàng）目，找到（dào）與之配套的方法，進行充分的方法驗證，從檢測員能力，儀器設備性能，校（xiào）檢結果（guǒ）是否（fǒu）能滿（mǎn）足實驗需要，實驗檢測多（duō）次實驗，檢測環境（jìng）是否進行了充分的考慮，實驗確（què）認好實驗項目，認真學習標（biāo）準，理解標準，並（bìng）做到標準所（suǒ）規範（fàn）的步驟，並對自己實驗有了一定的信心後再去申請能（néng）力驗證為宜。
舉例：某實（shí）驗室未（wèi）經過充分實驗方法確認，實驗（yàn）平時做的（de）也少，直接申請了能（néng）力驗證。實驗過程生疏，照（zhào）方抓藥，手忙腳亂，造成稀釋梯度不夠，平板幹燥，菌落蔓延，無法出具（jù）具體數（shù）值，實驗失敗。
 
二、實驗室收到盲樣菌株標本（běn）後，首先應做（zuò）的事情利（lì）用集菌儀或者微生物檢查儀製備樣品。
 
1、檢（jiǎn）查標本的性狀和確認包裝情況（kuàng），然後按照要求去能力驗證（zhèng）網站提交收到樣品情況。
2、仔細閱讀參指導書，包括（kuò）標本如何保存的信息，進行實驗（yàn）室內部工作分配，明確工作任務和要求。
3、實驗前應嚴格按照作業指導書的要求製訂檢（jiǎn）驗流程（chéng），認（rèn）真做好準備工作，包括實驗中需（xū）要使用的器皿，須提前做好清潔滅菌。
 
三、能力驗證樣品處理。
 
1、定量（liàng）項目，西林瓶內樣品不可分割，應（yīng）全（quán）部用（yòng）於檢測。一（yī）般參考書指導的是加40mL稀釋液製（zhì）成40mL樣品。
 
2、定量項目樣品稀釋。指導書標明了稀釋範圍的，在稀（xī）釋範圍左右各加1個稀釋度進行（háng）；書上沒有稀釋範圍的（de），多做稀釋倍數，選擇合（hé）適的稀釋倍數計數（shù）（一般可稀釋至（zhì）10^-8）。
 
3、定量項目，除了要多做稀釋（shì）倍數外，同時同一稀釋（shì）度要多倒幾皿，從原理上來（lái）講，檢（jiǎn）測過程屬於隨機抽（chōu）樣檢查，平板越多（duō），數據越接（jiē）近真值。考慮性價比，又不可能一（yī）直瘋狂一個稀釋度（dù）很多平（píng）板，所（suǒ）以能力驗（yàn）證時候多倒幾皿，求好結果。
 
4、定性項目有一些重要步驟。
a、增菌及分離步驟尤其重要。選擇合適的增菌液和分離用培養（yǎng）基對目標菌的檢出非常關（guān）鍵，選擇兩種以上的（de）增菌液和（hé）分離用培養（yǎng）基對菌株作直接分（fèn）離和（hé）增菌後（hòu）分離。
b、劃線（xiàn）分離十分重要，要把增菌（jun1）液中的目標菌盡量多的表達出來，要分出單個菌落並盡可能多挑（tiāo）取可疑菌落，確保分離到目標菌。
c、生化試驗和血清學（xué）試驗以營養瓊（qióng）脂平板上的純培養細菌為好。
 
四、實驗過程一定要做陰陽對（duì）照，全程（chéng）空白對照。
 
再厲害的高手也有失（shī）手和看（kàn）走眼的時候，所以陰陽對照就是一麵鏡子。對於一些熒光染色後進行判讀的實驗顯得尤為重要。
這裏掃盲一個誤區，定量計數測菌數時，羞羞视频网站會（huì）認為空白就是直接取（qǔ）1mL無菌（jun1）水然後加入到平板裏，然後混菌（jun1）倒皿，這是錯（cuò）誤的。因為這樣（yàng）做（zuò）的話（huà），隻能模擬證明（míng）稀釋後倒平板這一步有沒有（yǒu）汙染（rǎn）。而無法證明從樣品稱取-樣品稀釋時候的（de）汙染質控情況。所以要做全程空白（bái）對照。
全程空白的含義就是把無菌液當成樣品，然後走（zǒu）一（yī）遍實驗過程。如果嚴格這（zhè）麽做的話，又會走向另一個（gè）極端，所以全程空白隻從取樣開始至稀釋（shì）10^-1做了簡化，而不做後續稀釋空白樣的混菌實驗。
在有些其他實驗時候，會（huì）有樣品（pǐn）空白以及稀釋液空（kōng）白，比如大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣的可以去看看，對於全程空白的意義理解有更好的幫（bāng）助。
 
五、培養基方麵需（xū）要注意的地方。
 
1、培養（yǎng）基配製充分混勻後再滅菌。
正確做法是用一部分水攪拌均勻後，再（zài）加入剩餘水量，混勻後滅菌或分裝。
 
2、混（hún）菌法倒皿要充分混勻。
培養基倒完要左5圈右（yòu）5圈（quān）（混勻速度一定要慢，目的是——避（bì）免培養基波動到二皿（mǐn）接觸的縫隙部分造成（chéng）後續汙染），找較水平位置冷卻凝固。
 
3、微（wēi）生物限度過濾結（jié）束後（hòu）培養基要不要覆蓋問題。
覆蓋的目（mù）的是為了阻止活（huó）菌在培養基表層通過鞭毛移動，造成片狀生長，無法計數這一不利現象的發生。這裏可以發揮主觀能動性-對於不運動的菌，可以不覆蓋，對於運動的菌覆蓋。
總結一下：
a長期檢測同一種樣品，不覆蓋並無蔓延現象，不覆蓋；長期檢測蔓（màn）延選擇了覆蓋，一直覆蓋。
b未知樣（yàng）品，進（jìn）行覆蓋（gài）和不覆蓋的比對（duì）實驗，然後決定以後同（tóng）樣的樣（yàng）品是否需要覆蓋。養（yǎng）成經驗。
c能力（lì）驗證實驗，覆蓋和不覆蓋的都做，不（bú）要吝惜那麽一點點培養基或耗（hào）材，畢竟能力驗證（zhèng）實驗做的漂亮才是實驗室（是室而不是人！）能力的綜合體現。
 
4、培養過程（chéng）防止（zhǐ）平皿幹燥。
培（péi）養過程中培養基可以（yǐ）倒的適當厚一些，比如25mL。培養箱底部接一個不鏽鋼盆，裝上足量無菌水（沒有就去買幾瓶（píng）什麽的水倒裏麵）。
 
5、培養完成（chéng）要保留實驗平皿和其他相關（guān）材料。
作（zuò）為能力驗證，原始記錄及（jí）實驗報告還沒出具完成，各種材料還是保留至（zhì）數據出具後較好，便於出現問題現查原因，馬上補救。
 
題外話：很多（duō）檢測員等結果出了問題然後到網絡上來求救，結果一問平皿已經洗掉了（le），那就不知道是什麽狀況（kuàng）了。有時候你問她她還會振振有詞的（de）講：10^-1，10^-2都蔓延了，不洗掉幹嘛，10^-5，10^-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我當（dāng）時真的無語，也不想多說話就沒繼續講了。現在（zài）我回（huí）答一下這個問題（tí）：我要你一套完整梯度濃度的平皿，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩（wěn）定（dìng），還有蔓延是個什麽狀況，到底有多少，是一片還是局（jú）部還是很小一部分，然後（hòu）根據（jù）整體數據估算結果（當然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你可控的範圍），是（shì）補救的一種（並不可取，屬於垂死掙紮）。定量實驗時，當天做完的稀釋樣品也要放冰箱裏，雖然實驗要求不能複（fù）檢或重複檢測，但（dàn）作為微生（shēng）物（wù）專業你是知道菌放在（zài）2-8℃下（xià）並不會長多（duō）少，如果第二天一看（kàn）數據有蔓延或疑問，馬（mǎ）上再做一（yī）次，這樣也（yě）應該在誤差範圍內出數。
 
6、 實驗培養過程勤（qín）觀察。
微生物培（péi）養過程一般需要幾小時到幾十小時，要利用（yòng）這段（duàn）時間觀察培養箱及菌（jun1）生長情況，比如溫度是否穩定，培養室內濕度如何（hé）等等，多思多看，準備預案。方有可能得到與盲樣（yàng）一致的實驗（yàn）結果。
原始記錄應有條理、思路清晰,完整準確地記（jì）錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要包含時（shí）間、試驗（yàn）現象、試驗結（jié）果三個要（yào）素，方便試（shì）驗出現問題的查找。