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一、要樹立科學必須真實的觀念，實驗態度要端正。
 
要懷著一顆為（wéi）了出具真實、準（zhǔn）確，可信數據而敬畏的（de）心去申請能力驗證。
實驗要求科學嚴謹,實驗要預先充分（fèn）練習和實（shí）踐。能力驗證是對實驗室綜合實驗水平（人員，設備，環境等多因素）的評價。
首先要選好實驗項目，找到與之配套的方法，進行充分的方法（fǎ）驗證，從（cóng）檢測員能力，儀器設備性能，校檢結果是否能滿足實驗需要，實驗檢測多次實驗，檢測環境是否進行了充分的考慮，實驗確認好實（shí）驗項目，認真學習標準，理解標準，並做（zuò）到標準所規範（fàn）的步驟，並對自己（jǐ）實驗有了一定的信（xìn）心後再（zài）去申請能力驗證為宜。
舉例：某實驗室未（wèi）經過充分實驗方法確認，實驗平時做的也少，直接申請了能力驗證。實驗過程生疏（shū），照方抓藥，手忙腳亂，造成稀釋梯度不夠，平（píng）板幹燥，菌落蔓延，無法出具具體數值，實驗失敗。
 
二、實驗室收到盲樣菌株標本後（hòu），首先應做的事情利用集菌儀或者微生物檢查儀製備樣品。
 
1、檢查標本（běn）的性狀和確認包裝情況，然（rán）後按照要求（qiú）去能力驗證網站提交收到樣品（pǐn）情況。
2、仔細閱讀參指導書，包括標（biāo）本如何保存的信息，進行實（shí）驗室內部工作分配，明確工作任務和要求。
3、實驗（yàn）前應嚴格按（àn）照作業指導書（shū）的要求製訂檢驗流（liú）程，認（rèn）真做好準備工（gōng）作，包括實驗中需要使用的器皿，須提前（qián）做（zuò）好清潔滅菌。
 
三、能力（lì）驗證樣（yàng）品處理。
 
1、定量項目，西林瓶內樣品不可分割，應全部用於檢測。一般參考書指導（dǎo）的是加40mL稀釋液製成40mL樣品。
 
2、定量項目樣（yàng）品稀釋。指導書標明了稀釋範圍的，在稀釋範圍左右各加1個稀（xī）釋（shì）度進行；書上沒有稀釋範（fàn）圍的，多做（zuò）稀釋倍數，選擇合適的稀釋倍數計數（一般可稀釋至10^-8）。
 
3、定量項目，除（chú）了要多（duō）做稀釋（shì）倍數（shù）外，同時（shí）同（tóng）一稀釋度要多（duō）倒幾皿，從原理上來講（jiǎng），檢測過程屬於（yú）隨（suí）機抽樣檢查，平板越多，數據越接近真值。考慮性價比，又不可能一直瘋狂一個稀釋度很多平板，所以（yǐ）能力驗證時（shí）候多倒幾皿（mǐn），求好（hǎo）結果。
 
4、定性項目有一些重要（yào）步驟。
a、增（zēng）菌及分離步驟尤其重要。選擇合適的增菌液（yè）和（hé）分離用培養基對目標菌的檢出非常關（guān）鍵，選（xuǎn）擇兩種以上的增菌液和分（fèn）離（lí）用培（péi）養基對菌株作直接分離（lí）和增菌後分離。
b、劃（huá）線分離十（shí）分重要，要把增菌液中的目標菌（jun1）盡量多的表達出（chū）來，要分出單個菌落並盡可能（néng）多挑取可（kě）疑菌落，確保分離（lí）到目標菌（jun1）。
c、生化試驗（yàn）和血清學試驗以營養瓊脂平板上的純培養細菌為好。
 
四、實驗過程一定要做陰陽對照，全程空白對照。
 
再厲害的高手也有失手（shǒu）和看走眼的（de）時（shí）候，所以陰陽對照就是一麵鏡子。對於一些熒光染色（sè）後進（jìn）行判讀（dú）的實驗（yàn）顯得尤為重要。
這裏掃盲一個誤區，定量計數測菌數時，羞羞视频网站會認為空白就是直接取1mL無菌水然後加入（rù）到平板裏，然後混菌倒皿，這是錯誤的。因為這樣做的話，隻能模擬（nǐ）證明稀釋後倒平板這一步有（yǒu）沒有汙染。而（ér）無法證明從（cóng）樣（yàng）品稱取-樣品（pǐn）稀釋時候的汙染質控情況。所以（yǐ）要做（zuò）全程空白對照。
全程空白的含義就是把無菌液當成樣品，然後走一（yī）遍（biàn）實驗過程。如果嚴格這麽做的（de）話，又會走向另一個極端，所以全程（chéng）空白隻從取樣開始至稀釋10^-1做了簡化，而不做後續稀釋空白樣的混菌實驗。
在有些其他（tā）實驗時候，會有樣品空白以及稀釋液空白，比如大氣環境NOx和（hé）SO2的檢測，有興趣的可以去（qù）看看，對於全程空（kōng）白的意義理解有（yǒu）更好的幫助。
 
五、培養基（jī）方麵需要注意的地方。
 
1、培養（yǎng）基配製充分（fèn）混勻（yún）後再滅菌。
正（zhèng）確做法是用一部分水攪拌均勻後，再加入剩餘水（shuǐ）量，混勻後滅菌或分裝。
 
2、混菌法倒皿要充分混勻（yún）。
培養基倒完要左5圈右5圈（混勻（yún）速度一（yī）定要慢，目的是——避免培（péi）養基波動到二皿接觸的縫隙部（bù）分造成後續汙染），找（zhǎo）較水（shuǐ）平位置冷卻凝固。
 
3、微生物限度過濾結束後培（péi）養基要不要（yào）覆蓋問題。
覆蓋的（de）目的是為了阻止（zhǐ）活菌在培養基（jī）表層通過鞭毛移動，造（zào）成片狀生長，無法計數這一不利（lì）現象的發生。這裏可以發揮主觀能動性-對於不運動的菌（jun1），可以不覆蓋，對於運動的菌（jun1）覆（fù）蓋。
總結一（yī）下：
a長期檢測同一種樣品，不覆蓋並無蔓延現象，不覆蓋；長（zhǎng）期檢測蔓延選擇了（le）覆蓋（gài），一直覆蓋。
b未知樣品，進行覆蓋和不（bú）覆蓋的比（bǐ）對實（shí）驗，然後決定以（yǐ）後同樣的樣品（pǐn）是否（fǒu）需要（yào）覆蓋。養成經驗。
c能力驗證實驗，覆蓋和不覆蓋（gài）的都做，不要吝惜那麽一點點培養基或耗材，畢竟能力驗證實（shí）驗做（zuò）的漂（piāo）亮才是實驗室（shì）（是室而不是人！）能力（lì）的綜合體現。
 
4、培養過程防止平皿幹燥。
培養過程中培養基可以倒的適當厚一些，比如25mL。培養箱底部接一個不鏽鋼盆，裝上足量無菌水（沒（méi）有就去買（mǎi）幾（jǐ）瓶什麽的水倒裏麵）。
 
5、培養完成要保（bǎo）留實驗平皿和其他相關材料。
作為能力驗證，原始記錄及實驗報告還（hái）沒出具完成，各種材料還是保留至數據出具後較好，便於出現問題現查原因，馬上補救。
 
題外（wài）話：很多（duō）檢測員等結果出了問（wèn）題然後到網絡上來求救，結果一問平皿已經洗掉了，那就不知道是什麽狀況了。有時（shí）候你問她她還（hái）會振振有詞的（de）講：10^-1，10^-2都蔓延了（le），不洗掉幹嘛，10^-5，10^-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我當時真的無語（yǔ），也不想多說話就沒繼續講了。現在我回答一下這個問題：我要你一套完整（zhěng）梯度濃度的（de）平皿，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩定，還有蔓延是個什（shí）麽狀況（kuàng），到底有多少（shǎo），是一片還是局部（bù）還是很小一部分，然後根據整體數據（jù）估算結果（當然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你可控的範圍），是補救的一種（並不可取，屬於（yú）垂死掙（zhèng）紮）。定量實驗（yàn）時（shí），當天做（zuò）完的稀釋樣品也要放冰箱裏，雖然實驗要（yào）求不能複檢或重複檢測，但作為微生物專業你是知道菌放在2-8℃下並不會長多少，如果第二天一看數據有蔓（màn）延或疑問（wèn），馬上再做一（yī）次，這樣（yàng）也應該在誤差範圍內出數。
 
6、 實驗培養過程勤觀（guān）察。
微生物培養過程（chéng）一般需要幾小時到幾十小時，要利用這段時間觀察（chá）培（péi）養箱及（jí）菌生長情況，比如溫度是否穩定，培養室內濕度如何等等，多思多看，準備預案。方有可（kě）能得（dé）到與盲樣一致的實驗結果。
原始（shǐ）記錄應有條（tiáo）理、思路清（qīng）晰,完整準確地記（jì）錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始（shǐ）記錄要包含時（shí）間、試驗現象（xiàng）、試驗結果三個要素，方便試驗出現問題的查找。