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滅菌是指用物理或化學的(de)方法,殺死物體表麵和(hé)孔隙(xì)內的(de)一切微生物或生物體,即把所有生命的物(wù)質全部殺死。常用的滅菌方法可分為物理的和化學的兩類:物理方法如幹熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓(yā)蒸煮(zhǔ))、射線處理(超聲波、微波)、過濾、清洗和大量無菌水衝洗等措施。化學方法是使用甲醛(quán)、過氧化氫、高錳酸鉀、次氯酸鈉、抗菌(jun1)素、酒精化學(xué)藥品處理(lǐ)等。
微生物檢查培養(yǎng)基常用的滅菌方法主要是濕熱滅菌和過濾除(chú)菌。
1、濕熱滅菌:
蒸汽在冷凝時釋放出大(dà)量潛能,並且蒸(zhēng)汽具有強大穿透力,蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質和核酸的化(huà)學鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死(sǐ)亡。濕熱滅菌的效果,取決於致死溫度和致死時(shí)間。致死溫度(dù)是殺滅微生物的極限溫度。致死時間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時間。
高壓蒸汽滅菌適合於耐高溫培養基(jī)、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養基分裝後應(yīng)立(lì)即滅(miè)菌,應在當天內(nèi)完成滅菌工(gōng)作,不可過夜。消(xiāo)毒(dú)時(shí)間不宜過長,也不能超過規定的(de)壓(yā)力範(fàn)圍,否則(zé)有機物質就會在(zài)高溫下分(fèn)解,失去營養作用,也(yě)會使培養基變質、變色,甚至難以凝固。
培養(yǎng)基配製後,應按驗證(zhèng)過的高壓滅菌程序滅菌。2015版《中國藥典》第(dì)三次公示稿(gǎo),1106 非無菌產品微生物限度檢(jiǎn)查:控製菌檢查法中,列出部分培養基的滅菌(jun1)條(tiáo)件,如下(xià)表所示:
培養基名稱 |
滅菌條件 |
腸道菌增(zēng)菌液體培養基 |
加熱(rè)至100℃ 30分鍾,立即冷卻 |
紫紅(hóng)膽鹽葡萄糖瓊脂培養基(jī) |
加熱煮沸(不能在高壓滅菌器中加熱) |
RV 沙門菌增菌液體培養基 |
滅菌溫度不能超過115℃ |
木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培(péi)養基 |
加熱至沸騰(téng)(不能在高壓滅菌器中加熱) |
其他未明確標(biāo)示滅菌方(fāng)法的(de)培養基(jī),按供應商標簽所示滅菌方法滅菌或(huò)按驗證過的高壓滅(miè)菌程序滅菌。
2、過濾除菌:
一些抗(kàng)生素及有機物等,遇熱容易分解,不能與培養基一(yī)起進(jìn)行高溫滅菌,而要使用細菌過濾(lǜ)器濾去其(qí)中的雜菌,例如含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養基。過濾後的溶液要立(lì)即(jí)加入培(péi)養(yǎng)基(jī)中,若為液(yè)體培養(yǎng)基,可在培(péi)養基冷卻至30℃時加入;若(ruò)為固體培養基,必須在培養基(jī)凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻(yún)。
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