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滅菌是指用(yòng)物理或(huò)化學的(de)方法,殺死物體表麵和孔隙內的一切微生物(wù)或生物體,即把所(suǒ)有(yǒu)生命的物質全部殺死。常用的滅菌方法可分為物理的和化(huà)學的兩類(lèi):物理方法如幹熱(rè)(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(lǐ)(超聲波、微(wēi)波)、過濾、清洗和大量無菌水衝洗等措(cuò)施。化學方法是使用甲醛、過氧化(huà)氫、高錳酸(suān)鉀、次氯(lǜ)酸鈉、抗菌素、酒精(jīng)化學藥品處理等。
微生物(wù)檢查(chá)培養基常用的滅菌方法主要是濕熱(rè)滅菌和過濾除菌。
1、濕熱(rè)滅菌:
蒸汽在冷凝時釋放出大量潛能,並且蒸汽具有強大穿透力,蒸汽的濕熱破(pò)壞(huài)菌體蛋白質和核酸的化學鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的(de)效果,取決於致死溫度和致死時間。致死溫度是殺滅微生(shēng)物的極限溫度。致死時間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時(shí)間。
高壓蒸汽滅菌適合於耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌(jun1)。培養基分裝後應立即滅(miè)菌,應在當天(tiān)內完成滅菌工作,不可過夜。消毒時間不宜過長,也不能超過規定的壓力範圍,否則有機物質就會在高溫下分解,失去營養作用,也會使培養(yǎng)基變質、變色,甚至難以凝固。
培養基配製後,應(yīng)按驗(yàn)證過的高壓滅(miè)菌程序滅菌。2015版《中國藥典》第三(sān)次公示稿,1106 非無菌產品微生物限度檢查:控製菌檢查法中,列出部(bù)分培養基的滅菌條件,如下表所示:
培養基名稱 |
滅菌條件 |
腸道(dào)菌增(zēng)菌液體培養基 |
加熱至100℃ 30分鍾,立即冷卻 |
紫紅膽鹽葡(pú)萄糖瓊脂培養基 |
加熱煮沸(不(bú)能在高壓(yā)滅菌器中加熱) |
RV 沙門菌增菌液體培養基 |
滅菌溫度不能超過115℃ |
木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基 |
加熱至沸騰(不能在(zài)高壓滅菌器中加熱) |
其(qí)他未明確標示滅菌(jun1)方法的培養基,按供應商標簽所(suǒ)示滅菌(jun1)方法滅菌或按(àn)驗證過的高壓滅菌程序滅菌。
2、過濾除菌:
一些抗生素及有機物等,遇熱容易分解,不能與培養基(jī)一起進行高溫滅菌,而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌,例(lì)如含抗生素的沙氏葡萄(táo)糖瓊脂培(péi)養基。過濾後(hòu)的(de)溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若(ruò)為(wéi)液體培養基,可在培養基冷卻至30℃時加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養基凝固之前(50-60℃)加入(rù),振蕩使溶液與其他成分混合均勻(yún)。
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