上海秉越電子儀器有限（xiàn）公司（sī）

微生物限度儀是藥品、食品、化妝品等領域質量控製中用於檢（jiǎn）測微生物汙染程度的關鍵（jiàn）設備，其（qí）校準的準確性直接（jiē）關係到檢測數據的可靠性。

以下是關於微生物（wù）限度儀校準（zhǔn）方式的係統性描述，涵蓋校（xiào）準原理、操作步驟、驗證方法及注意事項。

一、校（xiào）準目的與依據（jù） 　　微生物限度儀的校準旨在確保儀器滿足以下技術要求：

1. 過濾（lǜ）係統性能：濾膜完整性、過濾速率及壓力控製符合（hé）標準。

2. 培養條件穩定性：溫度、濕度、氣體環境等參數準確可控。

3. 計數（shù）準確性：菌落計數與標準菌株的回收率符合藥典要求（qiú）。

4. 重複性與（yǔ）線性：多次檢測（cè）結果的偏差在（zài）允許範圍內。 　　校（xiào）準依據包括《中國藥（yào）典》(ChP)、《美國藥典》(USP)、ISO 11133係列標準以及儀（yí）器製造商的技術規範。

二、校準前準備

1. 環境條件

- 校準需（xū）在潔淨環境(如C級潔淨區)中（zhōng）進行，避免微生物汙染幹（gàn）擾。

- 溫（wēn）濕度應控（kòng）製在常溫(20-25℃)、濕度≤60%(防止濾膜受潮)。

2. 標準物質與（yǔ）工具

- 標準菌株：如（rú）枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)等，用（yòng）於挑戰試驗（yàn）。

- 儀器工具：壓力計(精度±0.5 kPa)、流量計(精度±1 mL/min)、溫度計(±0.1℃)、顯微鏡(100倍放大)等（děng）。

- 驗證（zhèng）用濾膜：孔徑0.45 μm或1.0 μm(根據用途選擇)，需預先滅菌處理。

3. 儀器狀態檢查

- 清潔過濾裝（zhuāng）置、培養艙及管路，確保無殘留物或堵塞（sāi）。

- 檢查電（diàn）源（yuán）、氣壓源、溫控（kòng）係統（tǒng）等基礎功能（néng）正常。

三、核心校準項目與步驟

1. 過濾係統（tǒng）校準

- 濾膜完整性（xìng）測試

- 氣（qì）泡法：將濾膜浸入水中，通入（rù）壓縮空氣，觀察濾膜表麵是否均（jun1）勻（yún）產生氣（qì）泡。無連續氣泡視為合格。

- 壓力保持法：向濾膜施加標準壓力(如20 kPa)，保持30秒，壓力下降（jiàng）不超過5%為合（hé）格。

- 微生物挑（tiāo）戰法：使（shǐ）用枯草芽孢（bāo）杆（gǎn）菌懸液(約1×10⁶ CFU/mL)，過濾後培養，濾膜背麵無（wú）菌落生長則完整性合格。

- 過濾速率與壓力校準（zhǔn）

- 設定不同壓力值（zhí）(如10 kPa、20 kPa)，測定500 mL標準菌液(如大腸埃希菌懸（xuán）液，1×10³ CFU/mL)的（de）過濾時間。

- 對比實際過濾時間與儀器標稱值，偏差應≤10%。 　　- 記錄壓力-流量曲線，確保線性關係符合儀器（qì）設計參數。

2. 培（péi）養條件校準

- 溫度（dù）均勻性驗證

- 在培養艙內放（fàng）置至少3個溫度探頭(上、中、下位置)，設（shè）置37℃(細菌培養（yǎng）)或25℃(黴菌培養)，穩定（dìng）後各點溫差應（yīng）≤0.5℃。

- 使用恒溫培養箱作為對（duì）照，確保儀器溫控係統無偏差。

- 濕度與氣體環境控製

- 對於需厭氧條件的培養，需驗證（zhèng）氮氣（qì）或二氧化碳的流量(如（rú）10-20 mL/min)，並通過厭氧指示劑(如亞（yà）甲藍（lán）)確認無氧環境。

- 濕度控製可通過（guò）放置幹燥劑或加濕裝置，目標濕度範圍為50-70%。 　　3. 計數準確性驗證

- 標準（zhǔn）菌株回收率（lǜ）試驗

- 製備已知濃度的（de）標準菌液(如枯草芽孢杆菌，10-100 CFU/mL)，按儀器程序過濾並培養。

- 計算回收（shōu）率（lǜ）：回收率 = (實際CFU / 理論CFU) × 100%，需達到50%-200%(參考ChP要求)。

- 平行測試6次，計算相對標準偏差(RSD)，要求RSD ≤20%。

- 陰性（xìng）對照與空白（bái）驗（yàn）證

- 使用無菌（jun1）生理鹽水代替菌液，過濾（lǜ）後培養，陰性對照組應無微生物生長。

- 檢查濾膜本身（shēn）無菌落（luò），排除假陽性幹擾。

4. 重複性與線性驗證

- 重複性測試

- 同一批次菌液(如黑曲黴懸液，濃度1×10² CFU/mL)重複過（guò）濾6次，計算CFU的RSD，要求≤15%。

- 不同操作人員（yuán）測試同一樣品，結果偏差應≤10%。

- 線性範圍（wéi）驗證

- 製備梯度濃度菌液(如（rú）10¹-10⁴ CFU/mL)，過濾後（hòu）計數，繪製CFU-濃度曲線（xiàn）。

- 線性相關係數(R²)應≥0.98，表明（míng）儀（yí）器在量程內響應良好。

四（sì）、校準周期與記錄

- 校準頻率：建議每年至（zhì）少校準（zhǔn）一（yī）次，或在以下情況後重新校準（zhǔn）：

- 儀器維修、關鍵部件更換(如濾膜夾具、壓力傳感器)。

- 檢測數據異常波動或不符（fú）合曆史趨勢（shì）。

- 實驗室（shì）搬遷或環境條件重大變化。

- 記錄與證（zhèng）書

- 詳（xiáng）細（xì）記錄校準數據、使用的標定設備、操作人員及結論。

- 出具校準證書，標明儀器編號、有效期（qī）及符合的標準(如ChP、ISO)。

五、常見故障與應對措施

1. 濾速異常

- 原因：濾膜堵塞、壓力傳感器失靈、管路泄漏。

- 解決：更換濾膜（mó），校準（zhǔn）壓（yā）力（lì）計，檢查氣密性。

2. 溫度（dù）偏差過大

- 原因：加熱模塊老化、溫（wēn）控探頭位置偏移。

- 解決：調整探頭位置，更（gèng）換加熱元件。

3. 回收率偏低

- 原因：濾（lǜ）膜吸附微生物、培養（yǎng）時間（jiān）不足。

- 解決：改用低吸附濾膜(如混合纖維素酯膜)，延長培養（yǎng）時間至72小時。